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要根據實際情況選擇適合的細胞凋亡檢測方法

更新時間:2022-12-19點擊次數:477
  細胞凋亡(apoptosis)是一種在多細胞生物體中發生的程序性細胞死亡形式,屬于細胞的正常生理過程,在生物體進化、內環境的穩定以及發育過程中起著重要作用,具有重要生物學意義及復雜的分子生物學機制。
  
  在生物學研究過程中常常需要檢測細胞凋亡情況。目前至少有十數種檢測細胞凋亡的方法,大致可分為基于細胞形態、生物學功能和生化標記三大類。每一方法都有其優缺點,需要根據實際情況選擇適合的細胞凋亡檢測方法。
 
  

細胞凋亡檢測

 
 

  1、電子顯微鏡檢測方法
  
  在透射電鏡下,凋亡細胞體積變小。凋亡Ⅰ期(pro-apoptosisnuclei),染色質高度盤繞,出現許多空泡結構;Ⅱa期細胞核的染色質高度凝聚、邊緣化;凋亡晚期出現核解體,產生凋亡小體。
  
  2、細胞核形態染色法
  
  相比細胞凋亡的其他形態變化,利用熒光染料配合熒光顯微鏡對細胞核形態的觀察也是較為直接的指標。常用的DNA特異性染料有:Hoechst、DAPI以及碘化丙啶(PI)。Hoechst是與DNA特異結合的活性染料;DAPI為半通透性,用于常規固定細胞的染色;PI不能透過完整的細胞膜,但在凋亡中晚期的細胞和死細胞,PI能夠透過細胞膜而將細胞核染紅。因此將Annexin-V與PI匹配使用,就可以將凋亡早晚期的細胞以及死細胞區分開來(Annexin-V/PI法)。
  
  3、線粒體膜電位檢測
  
  線粒體跨膜電位的下降也是凋亡細胞一個重要特點,是細胞凋亡過程中初期發生的事件(早于核形態的變化和PS的外翻)。一旦線粒體跨膜電位崩潰,細胞就會進入不可逆的凋亡過程。一些親脂性陽離子熒光染料如Rhodamine123、DiOC6、JC-1、TMRM等,在線粒體跨膜電位存在的情況下可結合到線粒體基質,通過熒光顯微鏡觀察其熒光的增強或減弱可反應線粒體內膜電負性的增高或降低。
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